培养基的高压蒸汽灭菌

   1、掌握细菌分离培养方法
   2、掌握细菌的移植方法。
   3、学会对细菌各种培养性状的观察。
材质准备：
   1．器材：培养箱、接种环、酒精灯、灭菌吸管、灭菌平皿等。
   2．试剂：焦性没食子酸、连二亚硫酸钠、碳酸氢钠、10%氢氧化钠或氢氧化钾、凡士林、生理盐水等。
   3．培养基：普通肉汤、普通琼脂平板、普通琼脂斜面、半固体培养基、肝片肉汤厌氧培养基。
   4．材质：病料及细菌培养物。
方法步骤:
一．细菌的培养法
(一)细菌的分离培养
   1、划线分离法 将病料或细菌培养物在琼脂平板上连续划线，以获得独立的单个菌落，便于对菌落性状的观察，对分离的细菌作出初步的鉴定。
方法如下：
  (1)右手持接种环于酒精灯上烧灼灭菌，待冷。
  (2)无菌操作取病料，用灭菌的接种环钩取病料或待分离的细菌一环。
  (3)左手持平皿，用拇指、食指及中指将皿盖打开，角度小为佳，以免空气中细菌污染培养基。
  (4)接种环伸入平皿，将取得的材质涂于培养基边缘，将接种环上多余的细菌灼烧掉，然后自涂抹处成30～40°角，在平板表面进行分区划线或连续划线。
  (5)划线完毕，烧灼接种环，将培养皿盖好，用记号笔在培养皿底部注明被检材质及日期，倒置37℃温箱中培养18～24h，观察结果。
   2．倾注培养法 将液体被检材质或稀释后的被检材质与冷却至50℃左右的琼脂培养基直接混合，培养后观察细菌的生长情况。本法适用于检查病畜血液、尿液、牛奶及饮水中的活菌数。
  （1）根据待检材质中菌数的多少，用普通肉汤或生理盐水对其进行10-1、10-2、10-3…稀释。
  （2）分别用灭菌的吸管吸取各稀释度的检样1ml加入到无菌平皿中。
  （3）取充分溶化后冷却至50℃左右的琼脂培养基分别倾入各平皿内，摇匀，平放，待其凝固后倒置37℃温箱中培养。
  （4）统计培养基上生长的菌落数，乘以稀释倍数，即为每毫升待检材质中的活菌数。
（二）细菌的增菌培养
   将病料接种于液体培养基中进行培养称为增菌培养。本法适用于含菌较少的病料。当被检病料中含菌很少时，为增加分离培养成功的机会，先进行增菌培养，然后取培养液作划线分离培养。
（三）细菌的纯培养
   钩取平板培养基上孤立生长的一个菌落或菌种管中的菌苔，移种到另一培养基中，长出的细菌为纯种。本法适用于纯化细菌和移种纯菌，使其增殖后进行鉴定或保存菌种。
（四）细菌的移植
   1．斜面移植
  (1)左手持菌种管及琼脂斜面管，两管口齐并，管身略倾斜，斜面向上，管口靠近火焰。
  (2)接种环在酒精上烧灼灭菌。
  (3)将斜面管及菌种管的二棉塞一起拔出。
  (4)把灭菌接种环伸入菌种管内，钩取少量菌苔将其立即伸入斜面培养基底部，由下而上在斜面上做蛇行状划线，然后管口和棉塞通过火焰后塞好，接种环烧灼灭菌。
  (5)在斜面管口写明菌种名称、日期，置37℃温箱培养18～24小时，观察。
   2．肉汤移植 钩取琼脂平板上的单个菌落或菌种管中的菌苔移植到肉汤培养基中。
   3．从平板移植到斜面 无菌操作打开平皿盖，以灭菌接种环钩取少许菌落移于斜面管，方法同上。
   4．穿刺接种培养法 用接种针钩取菌落，于琼脂高层、半固体培养基、明胶培养基表面中心垂直刺入管底，然后由原路线退出接种针。