结核杆菌培养基的种类及应用

　自从1882年Koch发现以来，为促进生长，缩短培养时间，达到提前分离、鉴定的目的，人们对的营养、生理代谢及人工培养进行了一系列的研究，经过一个多世纪的不懈努力，已经对结核杆菌的生长规律有了比较深入地了解，并且形成了许多成熟的培养方法。尽管现代分子生物学技术在结核病研究中发挥着越来越重要的作用，但是结核杆菌的培养在结核病的诊断、流行病学指标、结核菌的分型鉴定、药敏试验、结核病药物的研究等方面依然有着不可替代的作用。
　　 1 按培养基的性状分类 
培养的培养基，从性状上分重点有、、等类型，这些各有特点。
　　1.1 基 *常用的是，也是*具代表性的一种，其他的还有小川辰次（Tatsujiogawa）鸡蛋和Middle brook 7H10、7H11等等。在中，由于可以直接观察菌落的形态并可做鉴别用，因此常用在临床标本的分离培养、鉴别、保存菌种及对抗结核药物的敏感性测定等方面，缺点是结核菌生长缓慢。
　　1.2 常用的有苏通（Sauton）培养基、Middle brook 7H9等。在中能够更广泛的接触营养成分，因此在液体中生长相对较快,重点在液体表面生长，搅动时下沉至管底，可获得大量的。重点缺点是：在对临床标本的收集、采样、运输方面有不利的一面；不能根据肉眼观察菌落形态；污染机会多，影响的生长，污染时不易与鉴别，需涂片染色镜检判断是否生长。
　　1.3 改良苏通半流体琼脂培养基是一种人工综合，基质透明，呈半流体状态，生长的结核杆菌形成白色颗粒状菌落悬浮于中段，便于观察。
　　1.4 Septi-Check AFB双相培养基是国外应用较早的一种［1］，采用BD**式封闭式固液双相一体化培养基设计。液相为Middle brook 7H9分枝杆菌专用，可迅速繁殖分枝杆菌，固相为3种平面：Middle brook 7H11和改良的L-J用在及时将增菌肉汤内分枝杆菌进行分离纯化以获得单个菌落，巧克力琼脂用在早期发现污染菌，避免时间浪费。由于有液相作为基础，因此结核杆菌生长较快，也是一种非常有效的。国内有用平菇制备的平菇双相［2］是利用平菇浸出液为基础，加小牛血清、琼脂等成分而配制的一种培养基，根据琼脂的量不同制成液相、固相培养基。在国内应用较少，重点特点是成本低，制备简单，适合于基层使用，有一定的研究价值。
　　2 按成分分类 
重点分为以鸡卵和琼脂为基础的两种［3］。为了使结核杆菌达到快速生长的目的，可加上血液、椰汁、平菇液等不同营养成分，从而配制出各种不同的。
　　2.1 以鸡卵为基础的 有L-J、Ogawa、丙酮酸钠和丙酮酸钠细胞色素C培养基等。在鸡卵为主的培养基中，鸡卵液是关键成分，在制备培养基时，要充分考虑鸡卵液的新鲜程度以及营养成分是否受到破坏。
　　2.1.1 L-J培养基 是一种经典的［4］，重点成分有天门冬素、KH2PO4、MgSO4?7H2O、枸橼酸镁、甘油、鸡卵液等，需要血清凝固器对培养基进行凝固，以保证培养基中有一定的凝固水，以满足长时间培养的需要。根据成分种类及剂量的不同，又可分为酸性L-J培养基和碱性L-J培养基。将L-J培养基中KH2PO4的量由2.4g增加为14g，就是酸性L-J培养基，而将KH2PO42.4g改为K2HPO43.6g，就是碱性L-J培养基。L-J培养基制备简单，重点用在分枝杆菌初次分离培养、传代培养、菌落观察、保存菌种、药物敏感性测定及菌种鉴定等，而酸性L-J培养基和碱性L-J培养基用在分枝杆菌分离培养时，标本分别用碱和酸处理。结核杆菌在L-J培养基上生长时，培养时间较长，大约在4~8周，因此不利于临床快速检测的需求，但作为其他快速诊断的参照，以及作为结核杆菌诊断的标准有非常重要的意义。
　　2.1.2 Ogawa培养基 成分较少，又少了天门冬素，因此是一种比L-J培养基更为经济的培养基，重点成分有谷氨酸钠、KH2PO4、甘油、鸡卵液等，还可以通过调整KH2PO4的量及谷氨酸钠的量制备成改良培养基（Modified Ogawa），此培养基的用途与L-J培养基相同，由于价廉，特别适合于发展中国家［5］。
　　2.1.3 是在L-J培养基的基础上加入丙酮酸钠，除去甘油制备而成，重点用在从标本中分离牛型分枝杆菌或作为本菌的传种及保存。而丙酮酸钠细胞色素C培养基是在Ogawa培养基基础上，杨乐荫等用0.1%丙酮酸钠代替甘油，并加入2.5%葡萄糖液及细胞色素C制成丙酮酸钠细胞色素C培养基，与丙酮酸钠培养基、Ogawa培养基对临床标本比较，其培养的培养阳性率*高，显示了丙酮酸钠细胞色素C培养基的优越性。
　　2.2 以琼脂为基础培养基 包括苏通（Sauton）培养基Middle brook 7H9、7H10、7H11、7H12，匡氏培养基Proskauer培养基和Beck等。这些重点是由无机盐类及一系列的有机化合物等成分组成。琼脂的作用重点是赋形剂，通过调整琼脂的量，一方面可以制备成不同性状的培养基；另一方面，在中的少量琼脂有利于结核杆菌在中段形成菌落，从而便于观察。
　　2.2.1 Sauton培养基［6］ 重点成分有天门冬素、K2HPO4、MgSO4?7H2O、柠檬酸、枸橼酸铁铵、甘油等，根据是否加入琼脂及琼脂的量，又形成了及（也称改良苏通半流体培养基）等。在的制备上，也不需要特殊的设备，通过高压灭菌法既可处理，因此操作简单，重点用在牛型分枝杆菌的培养，卡介苗的生产及***对结核杆菌的作用的研究中。
　　2.2.2 Middle brook系列 是国外*常用在结核杆菌研究和诊断目的的之一，从成分上看，*大的特点是成分多、配制复杂［6］，但是培养时间短，因此越来越受到国内外学者的关注，其中7H9、7H12为，7H10、7H11为。通过在中加入标记14C的棕榈酸，当有分枝杆菌生长时，就可利用中的标记物而产生有放射性14CO2,然后由BACTE TB 460监测切换器检测其含量，因此非常敏感。Middle brook系列培养基重点用在分枝杆菌培养及药物敏感性的测定。
　　2.2.3 Proskauer和Beck 使用简便，但是菌落不典型，呈扁平状、露滴状，多为光滑型。