人胱抑素C ELISA 试剂盒

1. 检测原理

本试剂盒采用**双抗体夹心酶联免疫吸附法（Sandwich ELISA）**定量检测人血清、血浆或尿液中的胱抑素C（Cystatin C）浓度。

• 包被抗体：微孔板预包被抗人Cystatin C单克隆抗体。

• 捕获与检测：

  • 样本中的Cystatin C与包被抗体结合。

  • 加入生物素标记的检测抗体，形成“抗体-抗原-抗体”复合物。

  • 加入链霉亲和素-HRP（Streptavidin-HRP）结合生物素。

• 显色反应：加入TMB底物后，HRP催化显色（蓝色），终止后变为黄色，在450 nm处测定吸光度（OD值），OD值与Cystatin C浓度成正比。

2. 适用范围

• 样本类型：人血清、血浆（EDTA/肝素抗凝）、尿液（需离心去除沉淀）。

• 应用领域：

  • 肾功能评估：Cystatin C是肾小球滤过率（eGFR）的敏感标志物。

  • 心血管疾病风险预测：与动脉粥样硬化、心衰相关。

  • 科研：肾脏疾病、衰老或药物毒性研究。

3. 试剂盒组成

4. 样本采集与处理

• 血清/血浆：静脉采血后离心（3000 rpm，10 min），避免溶血或脂血。

• 尿液：晨尿或随机尿，离心（2000 rpm，5 min）后取上清。

• 储存：

  • 短期（≤7天）：2-8°C。

  • 长期：-20°C冻存（避免反复冻融）。

5. 实验步骤

1. 试剂准备：

   • 洗涤液：1×PBS-T（1:20稀释浓缩液）。

   • 标准品/样本恢复至室温（20-25°C）。

2. 加样与孵育：

   • 每孔加入100 μL标准品/样本，37°C孵育90分钟。

   • 洗涤3次。

   • 加入100 μL生物素检测抗体，37°C孵育60分钟。

   • 洗涤3次。

   • 加入100 μL SA-HRP，37°C孵育30分钟。

   • 洗涤5次。

3. 显色与终止：

   • 加入100 μL TMB底物，避光室温反应15分钟。

   • 加入50 μL终止液，立即测定450 nm OD值。

6. 数据分析

1. 标准曲线：

   • 以标准品浓度（ng/mL）为横坐标，OD₄₅₀为纵坐标，拟合4参数逻辑曲线（4PL）。

2. 样本计算：

   • 根据曲线方程计算浓度，尿液样本建议用肌酐校正（μg/g Cr）。

7. 注意事项

• 避免污染：更换吸头，避免交叉污染。

• 干扰因素：

  • 高血脂或溶血样本需预处理。

  • 类风湿因子（RF）可能引起假阳性。

• 质量控制：

  • 每板需包含空白孔、标准曲线和质控品。

  • 复孔CV应＜10%。

8. 参考范围

9. 储存与稳定性

• 未开封试剂盒：2-8°C保存，有效期12个月。

• 开封后：

  • 微孔板：密封后2-8°C保存，1个月内使用。

  • 标准品：-20°C分装保存。

10. 局限性

• 不与动物Cystatin C交叉反应：仅检测人源样本。

• 高浓度样本：需稀释后复测。

• 对比方法：结果可能与免疫比浊法或质谱法存在差异。

注：具体操作请以实际试剂盒说明书为准。