人抗核仁抗体(ANA)ELISA Kit种属多样完备
● 试剂盒操作步骤如下： ●
1.用TBS或PBS制备蛋白样品的稀释液。稀释度要取决于样品中存在的抗原浓度。由于抗原浓度通常未知，因此有必要检测宽范围的稀释度。
2.制备硝酸纤维素膜，用铅笔标上每个待测一抗/二抗的浓度。所需转印膜的数量取决于待筛查的一抗和/或二抗有多少种不同的稀释浓度。通常来说，一抗要检测一到两个稀释度，而二抗要检测两到三个稀释度。
3.将硝酸纤维素膜放在滤纸上,将抗原稀释液点在膜上。每个点的体积越少越好(1-5μl)，以保证点尽可能地小。如果需要使用5μl以上的样品，在点完一次后,干燥2-5分钟,再点一次。让膜干燥10-15分钟，或直至无可见水分。
4.用封闭液封闭膜上的非特异性位点，室温震荡孵育1h。
5.用包含1/10体积封闭液的洗涤液稀释一抗，并加到膜上，室温震荡孵育1h。
6.用洗涤液洗膜4次，每次5分钟，用尽可能大体积的洗脱液。
7.用包含1/10体积封闭液的洗涤液稀释二抗，并加到膜上，室温震荡孵育1h。
8.用洗涤液洗膜4次，每次5分钟，用尽可能大体积的洗脱液。
9.准备底物工作液。白介素1ELISA试剂盒厂家制备足够体积的工作液,以确保印迹点完全湿润,且印迹点在孵育过程中不会干。
10.将膜放在底物工作液中孵育5分钟。
11.将膜取出,放在塑料布或其它防护膜上。
12.蛋白一侧朝上,将印迹贴到胶片上,曝光30-60秒。为获得*结果,曝光时间可能不同。如果*次曝光不够,再试试2-5分钟。
13.在一张优化好的印迹膜上,底物产生的信号可能会持续6-24小时,这取决于具体的产品。
检测种属：人、大小鼠、兔、羊、猴、猪、豚鼠ELISA检测试剂盒等种属。标本：血清、细胞上清液、尿液、体液、灌洗液、脑脊髓、心房水、胸房水、组织等。
白介素1αELISA试剂盒(多种种属)实验科研认可品牌
人抗核仁抗体(ANA)ELISA Kit，
检测范围：欢迎QQ或电话索取原版说明书.
产品规格：96T/48T。
主要成分：酶标板,试剂,标准品等
经营种类：进口分装和原装、国产
性状：盒装液体
试剂盒保存：2-8℃低温保存。
标本：血清、细胞上清液、尿液、体液、灌洗液、脑脊髓、心房水、胸房水、组织等。
ELISA常用的方法：双抗体夹心法、间接法、竞争法以及BAS-ELISA等。
预期应用：ELISA法定量测定血清、、细胞培养上清或其它相关生物液体中的含量。
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●分子实验中常用生化试剂原理汇总●
5．在用乙醇沉淀DNA时，为什么一定要加NaAc或NaCl至终浓度达0.1～0.25mol/L？在pH为8左右的溶液中，DNA分子是带负电荷的，加一定浓度的NaAc或NaCl，使Na+中和DNA分子上的负电荷，减少DNA分子之间的同性电荷相斥力，易于互相聚合而形成DNA钠盐沉淀，当加入的盐溶液浓度太低时，只有部分DNA形成DNA钠盐而聚合，这样就造成DNA沉淀不完全，当加入的盐溶液浓度太高时，其效果也不好。在沉淀的DNA中，由于过多的盐杂质存在，影响DNA的酶切等反应，必须要进行洗涤或重沉淀。
6．加核糖核酸酶降解核糖核酸后，为什么再要用SDS与KAc来处理？加进去的RNase本身是一种蛋白质，为了纯化DNA，又必须去除之，加SDS可使它们成为SDS-蛋白复合物沉淀，再加KAc使这些复合物转变为溶解度更小的钾盐形式的SDS-蛋白质复合物，使沉淀更加完全。也可用饱和酚、氯仿抽提再沉淀，去除RNase。在溶液中，有人以KAc代替NaAc，也可以收到较好效果。
7．为什么在保存或抽提DNA过程中，一般采用TE缓冲液？在基因操作实验中，选择缓冲液的主要原则是考虑DNA的稳定性及缓冲液成分不产生干扰作用。磷酸盐缓冲系统（pKa＝7.2）和硼酸系统（pKa=9.24）等虽然也都符合细胞内环境的生理范围(pH)，可作DNA的保存液，但在转化实验时，磷酸根离子的种类及数量将与Ca2＋产生Ca3(PO4)2沉淀；在DNA反应时，不同的酶对辅助因子的种类及数量要求不同，有的要求高离子浓度，有的则要求低盐浓度，采用Tris-HCl（pKa=8.0）的缓冲系统，由于缓冲液是TrisH+/Tris，不存在金属离子的干扰作用，故在提取或保存DNA时，大都采用Tris-HCl系统，而TE缓冲液中的EDTA更能稳定DNA的活性。
8．如何选择聚乙二醇（6000）的浓度来沉淀DNA？采用PEG（6000）沉淀DNA，大小不同的DNA分子所用的PEG的浓度也不同，PEG的浓度低，选择性沉淀DNA分子量大，大分子所需PEG的浓度只需1％左右，小分子所需PEG浓度高达20％。本实验选择性沉淀4.3kb的pBR322质粒DNA，每毫升加入0.4毫升的30％ PEG，其终PEG浓度为12％。PEG选择性沉淀DNA的分辨率大约100bp。
9．抽提DNA去除蛋白质时，怎样使用酚与氯仿较好？酞与氯仿是非极性分子，水是极性分子，当蛋白水溶液与酚或氯仿混合时，蛋白质分子之间的水分子就被酚或氯仿挤去，使蛋白失去水合状态而变性。经过离心，变性蛋白质的密度比水的密度为大，因而与水相分离，沉淀在水相下面，从而与溶解在水相中的DNA分开。而酚与氯仿有机溶剂比重更大，保留在下层。作为表面变性的酚与氯仿，在去除蛋白质的作用中，各有利弊，酚的变性作用大，但酚与水相有一定程度的互溶，大约10％～15％的水溶解在酚相中，因而损失了这部分水相中的DNA，而氯仿的变性作用不如酚效果好，但氯仿与水不相混溶，不会带走DNA。所以在抽提过程中，混合使用酚与氯仿效果好。经酚**次抽提后的水相中有残留的酚，由于酚与氯仿是互溶的，可用氯仿**次变性蛋白质，此时一起将酚带走。也可以在**次抽提时，将酚与氯仿混合（1:1）使用。
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编辑：小檀20181024
