简述利用试剂盒法测定毒鼠强的原理并简述此方法检测固体样品的过程? ● 试剂盒法检测原理:毒鼠强可与二羟基萘二磺酸发生反应变为淡紫色,本方法检出限为1ug,低检出浓度为2ug/ml,浓度高时可变为深红色。 ● 检测固体样品过程:取2mL或2g样品放入比色管中,加入5mL乙酸乙酯,充分振摇,静置,取上清液2mL于试管中或表面皿上,在 85℃左右水浴中加热,待乙酸乙酯剩余1mL以下时,提高水浴温度挥干余液,放至室温后,加入1mL的纯净水充分溶解残渣,加入3滴毒鼠强显色剂,轻轻摇匀,加入 5mL毒鼠强试液,轻轻摇动后,将试管放入90℃以上水浴中,加热5min后取出,观察颜色变化。溶液颜色变为淡紫红色为毒鼠强阳性反应,随着毒鼠强浓度增加,紫色加深。
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●利用干扰实验即可鉴别ELISA试剂盒是否检测目的抗原,方法如下:● (1) 将针对试剂盒特异性的重组蛋白抗原和试剂盒中的检测抗体配置成antibody: antigen= 1:2的混合孵育液 (2) 37℃孵育15分钟后,代替原试剂盒中的检测抗体 (3) 后续操作按照试剂盒说明书进行,加检测抗体、酶复合物和底物 (4)实验完毕后,检测其标准曲线,如果标准曲线良好则说明加入的目的抗原和试剂盒抗体不匹配,试剂盒检测抗体针对的是非目的抗原,该试剂盒为伪劣假造ELISA试剂盒。 (5) 如果标准曲线无线性,则说明试剂盒检测抗体已被目的抗原中和或干扰,影响了其实际试剂盒抗体的检测作用,则该试剂盒检测抗体针对的是目的抗原。
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编辑:小檀20180925
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