酶联免疫吸附实验(ELISA)已经成为实验室常用的检测蛋白含量变化的实验技术,常用的检测方法是用抗原包被孔板,然后用一抗和二抗检测抗原的变化。这里使用两种抗体的原因一方面是信号放大的需要,另一方面是要减少成本。假如每种抗体都用酶或者荧光素标记的话,那将会需要多少种标记的抗体呢?而且可以肯定价格一定不菲。而用标记二抗的方法就可以大大减少需要标记抗体的数目,同时也能提高标记抗体的效用,这样就能用尽量少的标记抗体满足尽量多的实验要求。
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简述利用异羟肟酸铁快速检验氟乙酰胺的原理,简述此方法检测固体样品的过程? ● 检测原理:氟乙酰胺与羟胺在碱性条件下,生成异羟肟酸,与三价铁离子作用生成色异羟肟酸络合物。检出限50μg/ml。 ●方法:取待检液1ml左右于试管中(同时取一份同等量的蒸馏水或纯净水于另一试管中做阴性对照实验),各加盐酸羟胺溶液5滴,加氢氧化钠溶液10滴,置沸水中水浴10分钟以上,取出放冷后,加盐酸溶液调整溶液pH值到3~4之间,加三氯化铁溶液3~4滴,观察溶液颜色变化情况,阳性结果为粉红或紫红色。 ●固体过程:取2g~5g捣碎后的样品,加3倍于样品重的纯净水,充分振摇,静置或过滤得到1mL左右的澄清液。测定:取待检液1mL左右于试管中,加氢氧化钠溶液10滴,加盐酸羟胺溶液5滴,置沸水中水浴10min,取出放冷,加盐酸溶液调pH值3~5后,加三氯化铁溶液3~10滴,阳性结果为粉红或紫红色,阴性结果为浅黄或黄色。
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编辑:小檀20180918
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