简述利用异羟肟酸铁快速检验氟乙酰胺的原理,简述此方法检测固体样品的过程? ● 检测原理:氟乙酰胺与羟胺在碱性条件下,生成异羟肟酸,与三价铁离子作用生成色异羟肟酸络合物。检出限50μg/ml。 ●方法:取待检液1ml左右于试管中(同时取一份同等量的蒸馏水或纯净水于另一试管中做阴性对照实验),各加盐酸羟胺溶液5滴,加氢氧化钠溶液10滴,置沸水中水浴10分钟以上,取出放冷后,加盐酸溶液调整溶液pH值到3~4之间,加三氯化铁溶液3~4滴,观察溶液颜色变化情况,阳性结果为粉红或紫红色。 ●固体过程:取2g~5g捣碎后的样品,加3倍于样品重的纯净水,充分振摇,静置或过滤得到1mL左右的澄清液。测定:取待检液1mL左右于试管中,加氢氧化钠溶液10滴,加盐酸羟胺溶液5滴,置沸水中水浴10min,取出放冷,加盐酸溶液调pH值3~5后,加三氯化铁溶液3~10滴,阳性结果为粉红或紫红色,阴性结果为浅黄或黄色。
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引起 ELISA 测定结果与文献报导不一致的原因主要有三点,试剂因素、标本因素和操作因素。 试剂因素:1. 试剂应选择灵敏度高、特异性好、稳定性好、批间差小、操作方便的试剂。 2.不同厂家的试剂一定不能混用,包括底物和洗涤液。由于校准标准有差异,还有抗体、检测方法、试剂、交叉反应等因素都会导致对样本的检测结果不一致。如:有的厂家酶标板孔间 CV 值大于 20%,标记酶的活性及显色液的稳定性比较差,使用劣质的试剂必然导致结果的假阳性或假阴性。 3. 要注意试剂的批号和出厂日期,虽然试剂的有效期多为 1 年,好选择刚出厂的试剂盒。 4. 避免选择假的 ELISA 试剂盒。有些厂家为夸大生产 ELISA 的指标范围,用一种指标来冒充其它指标,造成各种种属、各种指标都可以做的假象。 标本因素和操作因素: 血清是常用的 ELISA 标本,血浆一般可视为与血清同等的标本,标本引起的假阳性和假阴性结果主要是干扰性物质所致,分为内源性物质和外源性物质两种。 内源性物质:有人认为大约 40%的人血清标本中含有非特异性干扰物质,可以不同程度影响检测结果。常见的干扰物质有:类风湿因子、补体、嗜异性抗体、嗜靶抗原自身抗体、医源性诱导的抗鼠 Ig (s) 抗体、交叉反应物质和其它物质等。 外源性物质:外源性物质常常是由于用于 ELISA 测定的血标本的采集、贮存等不当所致。如标本溶血、标本被细菌污染、标本贮存过久、标本凝集不全和采血管中添加物等影响。
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编辑:小檀20180911
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