●使用 RIPA 提取的总蛋白总结●: 1. 并非是真正意义上的总蛋白,相当一部分蛋白丢失在弃去的不可溶组分中。 2. 很多常用的内参,如 Actin,tubulin,LaminA,H3 等均在 RIPA 不可溶组分中被丢失。 3. 目标蛋白可能会在 RIPA 不可溶组分中被丢失,也可能不被丢失,具有不可预见性,非选择性。 4. 同种蛋白在不同样品中丢失的情况并不相同,蛋白丢失并不成比例。 5. 利用目的蛋白和内参比值做校正会出现偏差,不适合 WB 目的蛋白的半定量分析。
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ELISA应用:ELISA检测技术早在19世纪70,80年代就开发出来用于替代放射性同位素标记技术用于研究蛋白质间的相互作用(配体-受体,抗原-抗体),到如今已经接近50年的历史了。这个技术从科研的角度来说已经不具备**性,没有太多的价值,不值得专门进行研究,更多的是一个使用的工具。工业应用落后于基础研究,ELISA技术在制药领域的应用随着近20年生物制药领域的迅猛发展展现着越来越多的使用价值,当然ELISA的应用情况也越来越复杂,这样的复杂性也使得早期的基础研究并不再具有很好的指导意义,ELISA方法滥用错用往往导致实验结果出现系统性偏差,影响实验结果的真实性,做出错误的选择。本文的写作目的旨在作为文献之外关于ELISA实际应用的一个总结,反补基础研究的不足,使得该技术更具使用价值。
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编辑:小檀20180911
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