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引起 ELISA 测定结果与文献报导不一致的原因主要有三点，试剂因素、标本因素和操作因素。 试剂因素：1. 试剂应选择灵敏度高、特异性好、稳定性好、批间差小、操作方便的试剂。 2.不同厂家的试剂一定不能混用，包括底物和洗涤液。由于校准标准有差异，还有抗体、检测方法、试剂、交叉反应等因素都会导致对样本的检测结果不一致。如：有的厂家酶标板孔间 CV 值大于 20%，标记酶的活性及显色液的稳定性比较差，使用劣质的试剂必然导致结果的假阳性或假阴性。 3. 要注意试剂的批号和出厂日期，虽然试剂的有效期多为 1 年，好选择刚出厂的试剂盒。 4. 避免选择假的 ELISA 试剂盒。有些厂家为夸大生产 ELISA 的指标范围，用一种指标来冒充其它指标，造成各种种属、各种指标都可以做的假象。 标本因素和操作因素： 血清是常用的 ELISA 标本，血浆一般可视为与血清同等的标本，标本引起的假阳性和假阴性结果主要是干扰性物质所致，分为内源性物质和外源性物质两种。 内源性物质:有人认为大约 40%的人血清标本中含有非特异性干扰物质，可以不同程度影响检测结果。常见的干扰物质有：类风湿因子、补体、嗜异性抗体、嗜靶抗原自身抗体、医源性诱导的抗鼠 Ig (s) 抗体、交叉反应物质和其它物质等。 外源性物质:外源性物质常常是由于用于 ELISA 测定的血标本的采集、贮存等不当所致。如标本溶血、标本被细菌污染、标本贮存过久、标本凝集不全和采血管中添加物等影响。

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ELISA方法可以分为两类。**类：生物大分子的定量，**类：亲和力测定评价或者筛选。抗体的稳转、瞬和发酵过程的表达量监控，细胞因子的监控，体内抗体药物的药代动力学，药效生物标志物的含量检测和免疫原性测定等可划分为**类使用目的，杂交瘤的滴度测定，噬菌体展示的淘选筛选，体外抗体和对应靶点蛋白或细胞表面受体的亲和力评价可划分为**类使用目的。使用目的不一样，即使使用同样的试剂材料，也会有不同实验模式和拟合曲线。下面小编将以某抗体的定量的方法开发（**类目的）和亲和力检测方法开发（**类目的）为例，对不同使用目的开发策略进行介绍。

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编辑：小檀20180910