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在Western Blotting中使用内参，就是在试验中另外用内参抗体检测内参蛋白。wb抗体 wb抗体内参即内部参照，一般是指管家基因编码表达的蛋白，它们在各个组织和细胞中的表达相对恒定，在检测蛋白的表达水平变化时常用它来做参照。
        利用Western Blotting实验比较相同或者不同条件下的不同组织细胞中，目的蛋白表达量的相对多少，前提条件是等量的组织细胞蛋白上样，才有比较的基础，特别是表达量不高时，上样量的差别就很有可能影响结果的分析。因此，在Western Blotting试验中，进行内参的检测，可以校正蛋白质定量、上样过程中存在的误差，保证实验结果的准确性；此外，使用内参可以作为空白对照，检测蛋白转膜情况是否完全、整个Western Blotting显色发光体系是否正常。目前，在国内外发表的文章中，Western Blotting 实验结果必须进行内参校正已成为一种惯例。
        内参抗体种类很多，比如β-Actin、Tubulin、GAPDH、Lamin B、PCNA、Na+/K+ ATPase等，下面简单介绍下选择内参抗体应遵循的原则：wb抗体 wb抗体
一．样本种属来源
首先要考虑的就是实验样本来源于什么物种。
哺乳动物的组织或者细胞样本，通常选择β-actin、tubulin、GAPDH、Lamin B、PCNA、Na+/K+-ATPase等。
植物来源实验样本，则可以选择Plant actin、Rubisco等。
其他来源样本研究较少，所以就应该参照文献报导，选择合适的蛋白作为内参。
二．目的蛋白分子量wb抗体 wb抗体
选择内参抗体时，应该考虑目的蛋白分子量的大小。通常应该保证目的蛋白与内参蛋白分子量相差5KD以上。比如检测目的蛋白分子量为45KD，此时不适宜选择β-actin（42KD）作为内参，可以考虑选择GAPDH（36KD）作为内参。
三．目的蛋白表达部位
1.胞浆和全细胞蛋白：β-actin、GAPDH、Tubulin等
2.胞核蛋白：PCNA等
3.核膜蛋白：Lamin B等
4.胞膜蛋白：Na+/K+-ATPase等
5.线粒体蛋白：COX IV、VDAC1等
以上几条原则只是针对通常情况，但是需要注意的问题是——内参的选择需要考虑实际的试验环境，比如某些细胞中，由于组织缺氧、糖尿病等因素会导致GAPDH的表达增高，不适合做内参。比如在在凋亡实验时，Lamin等也不适合作为内参。因此设计实验方案的时候应该考虑这些因素并查询相应文献，在实验过程中也应该注意如果内参表达出现异常，应考虑这方面因素。
四．拜力生物提供了多种内参蛋白抗体，帮助客户根据个人需求选择*合适的内参蛋白抗体完成Western Blotting实验。wb抗体 wb抗体
β-Actin
Actin即肌动蛋白，是细胞的一种重要骨架蛋白。Actin大致可分为六种，其中四种是不同肌肉组织特异性的，其余两种广泛分布于各种组织中，包括 β-actin和γ-non-muscle actin。β-actin作为内参是得到了公认的，这是针对大多数组织和细胞来说的，它广泛分布于细胞浆内，表达量非常丰富，其含量占所有细胞总蛋白的50%。但是在一些少量特殊的情况下，如脂肪组织或细胞内，β-Actin的表达量就很少。β-actin由375个氨基酸组成，分子量大小为42KD左右。
Tubulin
Tubulin即微管蛋白，是细胞的一种骨架蛋白。Tubulin分为α、β、γ、δ、ε等多种tubulin，其中α-Tubulin和β-Tubulin可以形成异源二聚体，是形成微管的*主要的两种Tubulin。α-tubulin和β-tubulin分子量分别为55kDa和50kDa，其实际检测条带均在55kDa左右。作为内参，β-tubulin的蛋白水平通常不会发生改变，因此被广泛用于Western Blotting时wb抗体 wb抗体上样量是否一致的参照，也常被用于免疫染色观察细胞的微管结构。
GAPDH
GAPDH即甘油醛-3-磷酸脱氢酶，是参与糖酵解的一种关键酶，催化糖酵解的第六步，它还参与核转录等事件，核糖核酸转录、DNA复制和修复以及细胞凋亡。由4个30-40kDa的亚基组成，分子量146kDa，检测条带大约在36kDa。 GAPDH基因几乎在所有组织中都高水平表达，广泛用作Western Blotting的内参。请注意，某些生理因素，如缺氧和糖尿病会增加GAPDH在特定的细胞和组织的表达。
PCNA
PCNA即增殖细胞核抗原，因其只存在于正常增殖细胞及肿瘤细胞内而得名，以后的研究发现PCNA与细胞DNA合成关系密切，在细胞增殖的启动上起重要作用，是反映细胞增殖状态的良好指标。在细胞核内合成，并存在于细胞核内，其由261个氨基酸组成，分子量为36KD。
Lamin B
Lamin B即核纤层蛋白B, 是凋亡关键因素Caspase家族的作用靶子，受Caspase 的剪切而活化，位于核膜。其由586个氨基酸组成，分子量为66KD。
Na+/K+-ATPase
Na+/K+-ATPase即Na+/K+-ATP酶或Na+/K+-ATP泵，它会使细胞外的Na+浓度高于细胞内，当Na+顺着浓度差进入细胞时，会经由本体蛋白质的运载体将不易通过细胞膜的物质以共同运输的方式带入细胞。其由1023个氨基酸组成，分子量为113KD。wb抗体 wb抗体