皮质酮化学发光 ELISA 试剂盒

1. 检测原理

本试剂盒采用**竞争性化学发光免疫分析法（CLIA）**定量检测血清、血浆、组织匀浆或细胞培养液中的皮质酮含量。

• 包被抗原：微孔板预包被皮质酮-蛋白结合物

• 竞争反应：

  • 样本中的皮质酮与辣根过氧化物酶（HRP）标记的皮质酮竞争结合有限量的抗皮质酮抗体

  • 形成"抗体-抗原-HRP"复合物

• 信号检测：

  • 加入化学发光底物（如鲁米诺）

  • HRP催化底物产生光信号

  • 发光强度与皮质酮浓度成反比

2. 主要特点

• *高灵敏度：检测下限可达0.1 ng/mL

• 宽检测范围：0.2-50 ng/mL

• 优异特异性：与皮质醇交叉反应＜0.1%

• 快速检测：总检测时间约90分钟

• 多种样本兼容：适用于血清、血浆、脑脊液、组织匀浆等

3. 试剂盒组成

4. 样本处理

• 血清/血浆：

  • 采集后立即离心（3000g，10min）

  • 2-8℃可保存48小时，-20℃长期保存

• 组织样本：

  • 按1:9（w/v）加入PBS匀浆

  • 10000g离心10min取上清

• 细胞培养液：

  • 直接检测或适当稀释

5. 检测步骤

1. 加样：标准品/样本50μL + 抗体50μL

2. 孵育：37℃震荡孵育60min

3. 洗涤：自动洗板机洗板5次

4. 加酶：每孔加入HRP标记物100μL

5. 孵育：37℃30min

6. 洗涤：洗板5次

7. 显色：加入底物A/B各50μL

8. 检测：立即用化学发光仪读数（延迟2s，积分5s）

6. 结果计算

• 以标准品浓度为横坐标（对数坐标）

• 以相对发光单位（RLU）为纵坐标

• 采用四参数logistic曲线拟合

• 根据标准曲线计算样本浓度

7. 性能参数

• 灵敏度：0.1 ng/mL

• 检测范围：0.2-50 ng/mL

• 批内变异：＜8%

• 批间变异：＜12%

• 回收率：90-110%

8. 注意事项

1. 所有试剂使用前需平衡至室温

2. 避免反复冻融标准品

3. 化学发光底物需避光保存

4. 建议使用多通道移液器以提高重复性

5. 不同批次试剂不可混用

9. 储存条件

• 未开封试剂盒：2-8℃保存，有效期12个月

• 开封后：微孔板需密封保存，2个月内使用

10. 应用领域

• 应激反应研究

• HPA轴功能评估

• 抑郁症动物模型研究

• 肾上腺功能检测

注：本说明书为通用版本，具体操作请以实际试剂盒说明书为准。实验前建议进行预实验确定*佳样本稀释倍数。