MethylFlash Global DNA Hydroxymethylation (5-hmC) ELISA Easy Kit (Colorimetric)是一整套优化的缓冲液和试剂，通过以简化的“一步法”ELISA 形式特异性测量 5-羟甲基胞嘧啶 （5-hmC） 水平，以比色法定量整体 DNA 羟甲基化状态。作为 Epigentek 广受欢迎的全局 DNA 甲基化技术的第四代技术，它通过提高速度、简单性、灵敏度和可重复性，对前代 MethylFlash 试剂盒进行了进一步改进。

该试剂盒还经过专门优化，可与 MethylFlash Global DNA 甲基化 （5-mC） ELISA Easy 试剂盒（比色法）配合使用，同时定量甲基化 DNA 和羟甲基化 DNA。

该套件具有以下优点和特点：

• 快速 - 减少步骤，整个过程只需 2 小时*
• 稳健 - 改进的试剂盒组成使分析具有更大的“信号窗口”，同时减少重复之间的变化
• 方便 - 固有的低背景噪音，因此无需 DNA 变性和板封闭步骤
• 灵敏 — 检测限可低至 100 ng 起始 DNA 中 0.01% 羟甲基化 DNA
• 特异性 - 对 5-hmC 具有高度特异性，在样品 DNA 的指定浓度范围内，与未甲基化的胞嘧啶或甲基化的胞嘧啶没有交叉反应性
• 通用 — 阳性和阴性对照，可从单链或双链起始 DNA 中检测任何物种的 DNA 羟甲基化
• 准确 — 优化的阳性对照，可按百分比刻度进行分级分离，使分析更加准确，并与 HPLC-MS 分析具有高度可比性
• 灵活 - 条孔板规格使该分析可用于手动或高通量分析

* 基于一式两份的单个样品检测

背景
5-羟甲基胞嘧啶 （5-hmC） 作为具有转录调节功能的第六个 DNA 碱基，已被检测到在人和小鼠大脑以及胚胎干细胞 （ES） 细胞中含量丰富。在哺乳动物中，它可以由 5-mC 的氧化产生，这是一种由 5-mC-羟化酶的 10-11 易位 （TET） 家族介导的反应。5-hmC 已被证明具有组织特异性，范围从培养细胞系中检测不到的水平到人脑组织中的 0.6%，在其他一些物种中可高达总 DNA 的 8%。5-hmC 作为表型和基因表达的重要表观遗传修饰的生物学意义*近已得到认可。例如，5-hmC 含量的整体降低（DNA 低甲基化）几乎在所有癌症中都表现出来，并且也被提议作为癌症的分子标志物和治疗靶点。

原则和程序
该试剂盒包含定量 DNA 羟甲基化所需的所有试剂。在该检测中，DNA 与经过专门处理的条带孔结合，具有很高的 DNA 亲和力。使用基于 5-hmC mAb 的检测复合物一步法检测 DNA 的羟甲基化部分，然后通过在微孔板分光光度计中读取吸光度进行比色定量。羟甲基化 DNA 的百分比与测得的 OD 强度成正比。