EpiNext™ Post-Bisulfite DNA 文库制备试剂盒是一整套优化的试剂，用于在亚硫酸氢盐成功转化后制备 DNA 文库，用于各种基于 Illumina 平台的亚硫酸氢盐测序 （bisulfite-seq） 分析，例如全基因组亚硫酸氢盐测序 （WGBS）、氧化亚硫酸氢盐测序 （oxBs-seq）、还原代表性亚硫酸氢盐测序 （RRBS） 和其他基于亚硫酸氢盐的下一代测序应用。该试剂盒的优化方案和组分允许使用亚纳克起始浓度的 DNA 快速构建非条形码（单重）和条形码（多重）DNA 文库，因为 DNA 首先被亚硫酸氢盐转化，然后用于文库制备。该套件具有以下优点和特点：

• 允许将亚硫酸氢盐转化的 DNA 直接用于连接，从而消除了目前使用的 WGBS 和 RRBS 方法中经常发生的接头连接片段断裂的可能性。
• 从起始材料起始材料到文库扩增，只需 5 小时即可完成快速作。
• 无凝胶大小选择/纯化可节省时间并防止处理错误以及宝贵样品的损失。
• 高灵敏度和高效率 — 接头直接连接到亚硫酸氢盐转化的 DNA 片段上，减少了片段损失和选择偏差，这使得前亚硫酸氢盐起始 DNA 的起始量低至 1 ng。该试剂盒可用于无条形码（单重）和条形码（多重）DNA 文库制备。
• **的组分集，可适应 DNA 文库制备的每个步骤（连接、纯化、大小选择和文库扩增），以实现便利性、一致性和可靠性。
• Ultra HiFi 扩增能够实现可重现的高产量 DNA 文库，同时具有*小的序列偏差和低错误率。

背景信息
目前有几种方法，包括全基因组亚硫酸氢盐测序 （WGBS） 和亚硫酸氢盐低表达测序 （RRBS），用于全基因组 DNA 甲烷化分析。这些方法将未甲基化的胞嘧啶转化为尿嘧啶，而 5-甲基胞嘧啶在亚硫酸氢盐处理下保持不变。这使得表观遗传差异成为遗传差异，随后可以通过基于单一分辨率水平和全基因组尺度的测序来检测。然而，目前这种方法的实际应用并不理想，因为它们 （1） 需要大量的 DNA （>1 μg） 作为输入材料，这很难从有限的生物样品（如肿瘤活检、早期 embyros、embyronic 组织和循环 DNA）中制备;（2） 需要先剪切 DNA，然后连接到接头上，然后进行亚硫酸氢盐转化（连接后亚硫酸氢盐转化），这会导致接头 DNA 片段构建体中的大量 DNA 片段断裂，从而形成单标签模板，这些模板在文库富集过程中被去除;（3） 耗时 （2 天）。EpiNext Post-Bisulfite DNA 文库制备试剂盒旨在克服这些弱点。

原理和程序
使用此试剂盒，亚硫酸氢盐处理的DNA（为单链形式）被转化为双链DNA，并直接用于与扩增和测序所必需的BisDNA特异性适配器进行连接。然后对片段进行大小选择，并使用 MQ 微珠进行纯化，从而可以快速、**地选择 DNA 大小。然后用高保真 PCR 混合物扩增大小选择的 DNA 片段，确保以*少的起始材料获得*大产量，并以低错误率和*小偏差提供高度准确的文库 DNA 扩增。