EpiQuik™ m6A RNA 甲基化定量试剂盒（比色法）是一整套优化的缓冲液和试剂，用于对 RNA 中的 N6-甲基腺苷（m6A 或 6mA）进行比色定量。它适用于使用从任何物种（如哺乳动物、植物、真菌、细菌和病毒）分离的总 RNA 直接检测 m6A RNA 甲基化状态。该套件具有以下优点和特点：

• 使用 m6A 抗体进行类似比色 ELISA 的检测，步骤简单易懂，方便快捷。整个过程可以在 3 小时 45 分钟内完成。
• 高灵敏度，其中检测限可低至 10 pg 的 m6A。
• 独特的结合溶液使 RNA >70 nts 能够紧密结合到孔中，从而能够定量 mRNA 和 ncRNA（如 tRNA、rRNA 和 snRNA）中的 m6A。
• 优化的抗体和增强子溶液对 m6A 具有高度特异性，在样品 RNA 的指定浓度范围内与未甲基化的腺苷没有交叉反应性。
• 包括通用阳性和阴性对照，适用于定量任何物种的 m6A。
• 联排孔板规格使分析更加灵活，可用于手动或高通量分析。
• 简单、可靠且一致的分析条件。

N6-甲基腺苷 （m6A） 是真核生物中存在的 RNA 分子中*常见和*丰富的修饰。m6A 修饰由甲基转移酶复合物 METTL3 催化，并被*近发现的 m6A RNA 去甲基化酶 FTO 和 ALKBH5 去除，它们以 α-酮戊二酸 （α-KG） 和 Fe2+ 依赖性方式催化 m6A 去甲基化。结果表明，METTL3、FTO 和 ALKBH5 在许多生物过程中发挥着重要作用，从发育和代谢到生育能力。m6A 占所有 RNA 碱基甲基化的 80% 以上，存在于各种物种中。m6A 主要分布在 mRNA 中，也存在于 tRNA、rRNA 和 snRNA 等非编码 RNA 中。mRNA 转录本中 m6A 的相对丰度已被证明会影响 RNA 代谢过程，例如剪接、核输出、翻译能力和稳定性以及 RNA 转录。m6A RNA 甲基化酶和去甲基化酶缺陷诱导的 m6A 甲基化水平异常可导致 RNA 功能障碍和疾病。例如，由于 FTO 突变患者 FTO 活性增加，靶 mRNA 中 m6A 水平异常低，通过尚不确定的途径，导致肥胖和相关疾病的发病。RNA 中动态且可逆的化学 m6A 修饰也可能作为具有深远生物学意义的新型表观遗传标记。因此，更好地了解 m6A RNA 甲基化水平和 RNA 转录本上的分布的更多有用信息可能有利于疾病的诊断和治疗。

原则和程序
在该检测中，使用 RNA 高结合溶液将总 RNA 结合到剥离孔中。使用特异性捕获 N6-甲基腺苷抗体和检测抗体检测 N6-甲基腺苷 （m6A）。检测到的信号被增强，然后通过在微孔板分光光度计中读取 450 nm 波长的吸光度进行比色定量。m6A 的量与测量的 OD 强度成正比。该试剂盒中提供阴性和阳性 RNA 对照。可以进行标准曲线（范围：0.02 至 1 ng m6A），也可以使用单一量的 m6A 作为阳性对照。由于 m6A 含量可能因组织而异，也不同于正常和疾病状态，或者在处理和未处理条件下会有所不同，因此建议运行重复样品，以确保生成的信号得到验证。该试剂盒将允许用户定量 m6A 的**量并确定两种不同 RNA 样品的相对 m6A RNA 甲基化状态。