原位杂交检测|实验技术服务

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原位杂交检测|实验技术服务——pCzn1质粒+Arctic Express宿主菌低温表达体系。
我们具备丰富的蛋白表达设计经验及实验操作技巧，承诺客户不成功不收费。我们所有的实验数据真实可信，我们提供原始的表达菌株和克隆质粒，客户可以依据我们的实验报告重复我们的实验结果。
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测序实验流程：
（1）样品的固定；
（2）样品的制备和预处理；
（3）预杂交；
（4）探针和样品变性；
（5）用不同的探针杂交以检测不同的靶序列；
（6）漂洗去除未结合的探针；
（7）检测杂交信号，进行结果分析
(1)石蜡切片(5 um)，常规脱蜡水化： 二甲苯10min×3次、质量浓度为100%乙醇5 min×2次、95%乙醇5 min、70%乙醇5min、50%乙醇5 min、自来水洗5 min。
(2)正常山羊血清封闭，37℃ ，30min；
(3)加入I抗(兔抗鼠白蛋白)，37℃ ，1 h；
(4)Ⅱ抗(FITC标记，羊抗兔IgG，)，37℃ ，30min；
(5)8%硫氰酸钠，80℃ ，10 min；
Devil以新鲜配制的胃蛋白酶(4 mg／m1)将切片于37℃消化1～1.5 h；以甘氨酸溶液终止消化
(7)4%多聚甲醛固定2 min；梯度酒精脱水，空气干燥；
Musical Note将15ul Y染色体探针(cy3标记)加于组织上，盖上盖片，置于杂交盒内，60℃变性10 min；37℃ ，避光杂交；
(9)50％甲酰胺／2×SSC，37℃洗涤5 min；2×SSC，37℃洗涤5 min；
(10)0.1% 吐温20／4×SSC，37℃洗涤10 min，干燥后镜检。